刘 锐1 高会军1 徐 航1 马 龙1 刘利兵2 陈健康2 单芝香2
（第四军医大学：1空军医学系2第四军医大学教学实验中心，西安 710033）
Effects of injecting vitamin E on rat model with Retinopathy of prematurity
LIU Rui1, GAO Hui-Jun1, XU Hang1, MA Long1 , LIU Li-Bing2, QU Ping2, SHAN Zhi-Xiang2,
1The school aerospace medicine, 2The center of Basic Medicine Teaching Experiment, School Basic Medicine, Fourth Military Medicine University, xi’an, 710033,China
【Abstract】Objective To study the protective effects of vitamin E on Retinopathy of prematurity. Methods The rats were divided into 3 groups randomly. Control group was raised in normal circumstance for 14 days, model group was raised in high concentration of oxygen (75%~80%) for 7 days, then in normal circumstance for 7 days, experimental group was raised in the same circumstance with model group in addition to injecting vitamin E (75mg/kg) in the first 7 days. Results 1 the retina blood vessel in model group rats got thinner on the seventh day, and the amount of fresh blood vessel increased distinctly, while this change was not distinct in experimental group. 2 SOD activity level was higher in experimental group（81.31±16.57 U/mgprot）than those in model group(64.09±5.12 U/mgprot) （p<0.05）. While the MDA level were lower in experimental group(17.63±1.57nmol/mgprot) than those in model group(28.88±1.55nmol/mgprot), and higher than those in Control group(11.53±1.55nmol/mgprot) （p<0.01）. Conclusions Vitamin E can rise SOD activity level , reduce MDA level in eyeball, and can restrain pathological change of retinal blood vessel. So we can get the conclusion that vitamin E has great protective effect on Retinopathy of prematurity.
【Key words】Retinopathy of prematurity；vitamin E；Protection
【摘要】目的 探讨维生素E对早产儿视网膜病的保护作用。方法 将大鼠分为对照组、模型组和实验组。对照组在正常环境下饲养十四天，模型组在75%-80%氧浓度的吸氧箱中饲养7d，然后再置于正常环境下饲养7d。实验组给予与模型组相同的饲养条件，并于前七天每日给大鼠进行维生素E腹腔注射，注射剂量为75mg/kg。结果 1模型组大鼠在七天时视网膜血管主干管径变细，十四天时视网膜新生血管数目显著增多，而实验组的病理变化不明显。2实验组SOD为81.31±16.57 U/mgprot较模型组64.09±5.12 U/mgprot明显升高（p<0.05），从MDA测定结果看，实验组为17.63±1.57nmol/mgprot明显低于模型组28.88±1.55nmol/mgprot，但高于对照组11.53±1.55nmol/mgprot（p<0.01）。结论 维生素E可以提高眼球的SOD水平，降低MDA水平,减低视网膜血管的病理改变。使用维生素E对早产儿视网膜病有一定的保护作用。
【关键词】早产儿视网膜病；维生素E；保护作用
【中图号】R72 【文献标识码】A
早产儿视网膜病(ROP)，原称晶体后纤维增生症，是一种纤维增生性视网膜病变，其特征为视网膜缺血。临床上可出现视网膜变性、脱离、并发白内障、继发性青光眼、斜视、弱视，严重者可致盲[1]。研究表明：氧疗时间长，高动脉氧分压易导致ROP的发生发展[2]，且其病变过程与自由基的损伤关系密切。维生素E俗称生育酚，是人体中抗氧化系统中的重要组成成分，具有很高的抗自由基功能[3]。本实验对早产儿视网膜病大鼠模型进行腹腔注射维生素E，并观察对其的影响。从而探索早产儿视网膜病的预防方法，为临床提供参考依据。
1. 材料和方法
1.1 实验分组
将新生SD大鼠60只（体质量为3.3g-3.5g，鼠龄为1d，由第四军医大学实验动物中心提供）分为对照组、模型组和实验组。各组均有一只母鼠喂养。实验组在正常环境下饲养14d，模型组在75%-80%氧浓度的吸氧箱中饲养7d，然后再置于正常环境下饲养7d[4]。实验组除了与模型组相同的饲养条件，在放入有氧箱的7天内每日给大鼠进行维生素E腹腔注射，剂量为75mg/kg。
1.2 实验方法
1.2.1 视网膜血管观察
实验开始后第7天，各组大鼠分别取5只脱颈处死后，取出鼠眼，置于4％ 甲醛溶液中固定30min，沿角膜缘剪开眼球，去除晶状体及玻璃体，显微镜下观察拍照,并对照片进行分析。14d大鼠每组各取5只，取材以及观察方法同前。
1.2.2 SOD、MDA的检测
实验开始后第七天，各组大鼠分别取5只处死后，取出鼠眼，置入生理盐水中.将其尽可能吸干水分，放入已称重管中，在万分之一分析天平上称重后，研磨匀浆待测，SOD测定应用黄嘌呤氧化酶法，MDA采用硫代巴比妥酸缩合法。两项测定严格按照试剂盒说明书进行操作（试剂盒均由南京建成生物制品研究所提供），均用721分光光度计进行比色分析，
1.3 统计学处理
所有数据均以 ±ｓ表示，数据采用SPSS11.0统计软件进行方差分析，组间两两比较用LSD-t检验，P<0.05认为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 视网膜血管的观察：
对7d的大鼠行视网膜血管观察发现：对照组的大鼠视网膜血管干发育正常。模型组视网膜血管干较对照组变细,并出现部分闭塞。实验组视网膜血管干较对照组无明显变细。
2.2视网膜新生血管的观察：
对14d大鼠视网膜新生血管观察可见对照组新生血管发育数目正常，模型组新生血管数目增多，并可见局部血液渗出，实验组新生血管数目增多不明显
2.3 SOD以及MDA的变化
实验组SOD水平较模型组明显升高（p<0.05），模型组MDA水平明显高于实验组与对照组（p<0.01），但实验组MDA水平仍高于对照组（p<0.01）。见表1。
表1 SOD和MDA含量的比较
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组别 SOD （U/mgprot） MDA（nmol/mgprot） |
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对照组 79.18±2.20 11.53±1.55 b
模型组 64.09±5.12 28.88±1.55
实验组 81.31±16.57 a 17.63±1.57 b,c |
a与模型组比较P<0.05，b与模型组比较P<0.01，c与对照组比较P<0.01
3． 讨论
越来越多的研究发现,吸氧相关的病理过程中存在自由基的损伤，成为许多疾病的重要发病机制之一。我们使用新生鼠模拟早产儿进行实验 [5]。实验中我们发现，连续吸氧7d的大鼠视网膜血管主干管径变细，说明吸氧或者高血氧分压使视网膜血管变细，这样易导致周边小血管闭塞或停止发育，从而影响其后新生血管形成，这与早产儿视网膜病变的病理过程相似[6]。 众所周MDA、SOD是一对反映机体自由基和过氧化损伤的重要指标 ，在高血氧分压 ，视网膜MDA明显升高，说明出现了严重的自由基的损伤；另一方面，机体受到自由基损伤后能产生一定的自我保护机制。使SOD生成增加，但在模拟早产儿吸氧后的变化却不是这样，我们检测到视网膜SOD水平在高氧条件下显著下降，这种显著下降使氧自由基对视网膜的损伤进一步加重SOD这种不升反降的变化提示早产视网膜在高氧环境下缺乏自我保护，实验中血管变细、闭塞，反映的就可能是血管内皮细胞的过氧化损伤，也就是说在连续的高氧分压下，新生鼠的视网膜联同其血管共同受到了氧自由基的损伤。我们看到的血管变化仅仅是损伤后的结果。
维生素E是近年来倍受重视的自由基清除剂之一，其可以稳定体内的不饱和脂肪酸，拮抗其自身氧化过程。实验显示给予ROP模型以维生素E腹腔注射，实验组大鼠的眼球SOD水平有所提高，MDA水平较模型组下降明显，故可以得出结论：实验组的眼球抗氧化水平明显提高。而且对视网膜血管以及新生血管观察发现，实验组的大鼠在第七天时血管干无明显变细，14天时，新生血管数目增多不显著，即其病理变化不明显，故实验提示：在给乳鼠高氧浓度环境下同时给予腹腔注射维生素E可以有效预防ROP的发生和发展。
参 考 文 献
1. 叶蕾，王娟英，金爱英.吸氧方法在预防早产儿视网膜病变中的疗效观察[J].齐齐哈尔医学院报，2005,26:244
2. 夏文涛，唐亚勒.吸氧与早产儿视网膜病变因果关系分析[J].中国临床医生，2004，32：61
3. 冯安吉，海春绪，蒋宁，李文丽，袁晓亮，杨会宣. 维生素A 和维生素E对梭曼染毒大鼠自由基损伤的预防作用[J].中国药理学毒理学杂志，2002,16:53
4. 徐宏兵，陈晓隆.吸氧对新生大鼠视网膜影响的研究[J].眼科研究，2004，22(O5)494-497
5. Xiaolin Gu, Sara Samuel,Mohamed El-shabraey, Ruth B. Caldwell, Manuela Bartoli, Dennis N. Marals,et al.Effeets of sustained hyperoxia on revascularization in experimental retinopathy of prematurity[J]. Invesl Ophthalmol Vis Sci, 2002; 43(2):496-502
6. William A,Sliverman MD. A cautionary tale about supplemental oxygen :the albatress of neonatal medicine[J], Pediatrics, 2004; 113(2):394-396
